反相色谱法检测食品中维生素E
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方案简介

我们通常说的维生素E,也称为生育酚,即指α-生育酚,为微黄绿色透明黏稠液体,易溶于有机溶剂,不溶于水,对热稳定,对氧极不稳定,极易被氧化。维生素E,是一种性能优良的抗氧剂和营养剂,同时具有生物活性高、食用安全的特点,广泛应用于医药、保健品、食品、化妆品等领域,成为近年来备受关注的热点产品。

现采用太玮科技GOWON®DUAL C18进行检测,文中检测部分参照国家标准 GB5009.82-2016食品中维生素E的测定方法,能有效把β-生育酚、γ-生育酚同分异构体分离,分离度>1.5,结果能满足检测要求。


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检测项目/组分


α-生育酚(CAS号:10191-41-0 )、β-生育酚(CAS号:148-03-8)、γ-生育酚(CAS号:54-28-4)、δ-生育酚(CAS号:119-13-1)

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检测原理


试样中的维生素E经皂化(含淀粉先用淀粉酶酶解)、提取、净化、浓缩后,反相液相色谱柱分离,紫外检测器或荧光检测器检测,外标法定量。

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标准品制备


维生素E标准溶液(1.00mg/mL):分别准确称取α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚各50.0mg,用无水乙醇溶解后,转移入50mL容量瓶中,定容至刻度,此溶液浓度约为1.00mg/mL。准确吸取维生素 E 标准储备溶液各1.00mL于同一50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,此溶液中维生素 E各生育酚浓20μg/mL。

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样品制备


皂化:称取2g~5g(精确至0.01g),样品用约20mL温水混匀,经均质处理的固体试样转入150mL平底烧瓶中,加入0.5g~1g淀粉酶,放入60 ℃水浴避光恒温振荡30min后,取出,向酶解液中加入1.0g抗坏血酸和0.1g 2,6-二叔丁基对甲酚,混匀,加入30mL 无水乙醇,10mL~20mL氢氧化钾溶液,边加边振摇,混匀后于80℃恒温水浴振荡皂化30min,皂化后立即用冷水冷却至室温。

提取:将皂化液用 30 mL 水转入 250 mL 的分液漏斗中,加入 50 mL 石油醚-乙醚混合液,振荡萃取5min,将下层溶液转移至另一250mL的分液漏斗中,加入50mL的混合醚液再次萃取,合并醚层。用约100mL水洗涤醚层,约需重复3次,直至将醚层洗至中性(可用 pH 试纸检测下层溶液pH值),去除下层水相。

将洗涤后的醚层经无水硫酸钠(约3g)滤入250mL旋转蒸发瓶或氮气浓缩管中,用约15mL石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次,并入蒸发瓶内,并将其接在旋转蒸发仪或气体浓缩仪上,于40℃水浴中减压蒸馏或气流浓缩,待瓶中醚液剩下约2mL 时,取下蒸发瓶,立即用氮气吹至近干。用甲醇分次将蒸发瓶中残留物溶解并转移至10mL容量瓶中,定容至刻度。溶液过0.22μm 有机系滤膜后供高效液相色谱测定。

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色谱条件


色谱柱:GOWON® DUAL-C18 2.7µm 150×4.6mm(PN:0738-1546)
保护柱:核壳通用保护柱(PN:G2030-K11)
流动相:甲醇-水(92:8)
流速:1.0 mL/min
检测器/波长:DAD / 294 nm
柱温:20 ℃
进样量:10 μL

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色谱图


供试品图谱:

说明GOWON® DUAL-C18 2.7µm 150×4.6mmPN0738-1546)这款色谱柱能有效把β-生育酚、γ-生育酚同分异构体分离,分离度>1.5,对比其他色谱柱AB是不能把β-生育酚、γ-生育酚这两个同分异构体分离的。流动相有调整,能更便捷,快速检定,符合标准要求。

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